今天为大家解读一项发表于传染病学与病原体领域权威期刊Pathogens的研究，标题为“Physalin F Promotes AFG3L2-Mediated Degradation of VISA/MAVS to Suppress Innate Immune Response to RNA Virus”。该研究聚焦于RNA病毒感染所引发的过度天然免疫反应及相关自身免疫疾病，深入发掘并验证了一种来源于茄科植物的天然小分子化合物——酸浆苦味素F（Physalin F）的免疫抑制功能。

本研究由武汉大学医学研究院舒红兵团队主导完成，谱度众合在本研究分子机制解码环节提供的LiP-MS药物靶点筛选解决方案发挥核心作用：精准确证了Physalin F的直接结合靶点——线粒体m-AAA蛋白酶AFG3L2。这一关键数据，为后续阐明Physalin F如何通过增强AFG3L2的蛋白酶活性，进而降解核心接头蛋白VISA/MAVS、最终阻断RLR介导的天然免疫信号通路，提供了直接的物理结合证据，有力推动了针对过度炎症和自身免疫疾病的药物开发进程。

本研究采用“表型筛选-靶点确证-通路解析-体内外药效验证”的系统性研究范式：

❶ 化合物高通量筛选：建立ISRE报告基因系统，对包含903种天然小分子的化合物库进行高通量筛选，成功锁定Physalin F为RNA病毒诱导天然免疫反应的强效抑制剂。

❷ 靶点筛选与机制确证：利用谱度众合提供的LiP-MS药物靶点筛选方案，在复杂的全细胞裂解液中直接、高通量地筛选并确证Physalin F的物理结合靶蛋白为AFG3L2。随后结合CETSA（细胞热位移分析）和蛋白质截短突变技术，精准定位了小分子与靶蛋白的结合区域。

❸ VISA降解通路解析：通过CRISPR/Cas9技术构建AFG3L2敲低细胞株，并结合AFG3L2蛋白酶失活突变体（E575Q），系统论证了Physalin F通过变构激活AFG3L2蛋白酶活性加速VISA降解，从而形成负反馈调节。

❹ 体内免疫重塑评估：在小鼠骨髓衍生细胞（BMDMs/BMDCs）及VSV/SeV病毒感染的C57BL/6小鼠活体模型中，验证了Physalin F对IFN-β及IL-6等核心炎症因子的强力抑制作用，确证了其体内抗炎及免疫调节功效。

研究团队首先利用ISRE荧光素酶报告基因系统，从903种天然产物中筛选出Physalin F。体外实验表明，Physalin F能够以剂量依赖的方式（IC50 = 1.0 µM）抑制仙台病毒（SeV）诱导的ISRE激活。进一步研究发现，Physalin F不仅能显著下调下游抗病毒基因（IFNB1、IFI44、CXCL10）的转录水平，还能有效阻断天然免疫通路中关键激酶及转录因子（IRF3、STAT1、STAT2）的磷酸化活化。

（2）LiP-MS技术精准确证Physalin F靶向线粒体蛋白酶AFG3L2

明确药物的直接物理靶标是解析抗炎机制的关键前提，在这一颇具挑战的靶点发现阶段，谱度众合提供的LiP-MS药物靶点筛选方案发挥了引领作用：通过对全细胞裂解液进行蛋白酶敏感性构象变化分析，质谱从鉴定出的差异多肽中（涉及261个蛋白的319条多肽）精准识别了线粒体m-AAA蛋白酶的亚基AFG3L2。

随后的细胞热位移分析（CETSA）进一步证实了这一组学发现。结果显示，Physalin F的结合使AFG3L2的聚集温度从50.8°C显著降低至45.6°C，确证了二者的直接互作。

基于LiP-MS确定的核心靶点，研究团队进一步揭示了全新的免疫调控信号轴。实验证实，敲低AFG3L2会导致宿主细胞内VISA蛋白的异常积累；而过表达野生型AFG3L2（而非蛋白酶失活突变体E575Q）则能显著促进VISA的降解。更具突破性的是，LiP-MS结果不仅锁定了靶蛋白AFG3L2，还指明了具体的结合位点（包含aa739-750的锌金属蛋白酶结构域）。生化实验证明，Physalin F正是通过结合AFG3L2的这一特定区域，变构增强了其对VISA的蛋白酶水解活性，从根本上阻断了过度激活的抗病毒免疫信号传递。

本研究系统性地确证了天然小分子酸浆苦味素F（Physalin F）作为强效天然免疫抑制剂的功能，并描绘了其重塑宿主天然免疫稳态的全新分子调控图谱：

机制革新：突破膜蛋白研究壁垒，重构天然免疫“刹车”网络

本研究打破以往仅关注泛素化系统调控VISA/MAVS降解的局限，首次揭示线粒体内膜蛋白酶AFG3L2在生理状态下对VISA的组成型降解作用。在药物靶点探寻中，谱度众合的LiP-MS筛选方案发挥了关键作用。针对体外难纯化重组的跨膜复合物AFG3L2，该技术在复杂全细胞裂解液中直接、无偏倚地捕获其为Physalin F的物理结合靶点，并给出了药物保护的多肽片段线索（如aa739-750区域）。后续功能实验证实，Physalin F通过结合AFG3L2的该区域，增强其蛋白酶活性，加速VISA降解，从而阻断过度激活的TBK1/IRF3免疫信号级联。

转化愿景：从天然提取物到高确定性的靶向免疫调控枢纽 

该研究将传统药用植物（茄科植物）的活性成分与前沿的线粒体免疫稳态调控网络相连接。借助LiP-MS技术确证的AFG3L2靶点，Physalin F从机制模糊的广谱抗炎天然产物，转变为具有明确分子机制和高选择性靶点的“靶向变构增强剂”。这不仅从分子层面解释了其抑制炎症风暴的机制，更为干预RLR通路异常驱动的自身免疫疾病（如系统性红斑狼疮、Aicardi-Goutières综合征等）及RNA病毒感染引起的致死性炎症，提供了一个极具潜力的全新治疗靶点，极大推动了针对AFG3L2进行创新免疫调节剂开发的临床转化进程。